摘要：本实验以农业部国家标准为依据，采用固相萃取结合液相色谱(SPE-HPLC)建立了羊肾中

三氯苯唑及三氯苯唑酮的检测方法。样品中的三氯苯唑及三氯苯唑酮经乙腈提取，Cleanert

PCX/Silica固相萃取柱净化，VenusilXBPC18(L)色谱柱（4.6×250mm，5µm，150Å）分离，0.02

mol/L乙酸铵水溶液和乙腈为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，三氯苯唑及三氯苯唑

酮添加量为0.05mg/kg时，回收率在60%~100%之间，能够满足检测要求。

关键词:SPE-HPLC；三氯苯唑；三氯苯唑酮；CleanertPCX/Silica固相萃取柱；VenusilXBPC18(L)

色谱柱

前言

三氯苯唑是兽医临床常用的一种针对肝片吸虫病的特效驱虫药。由于毒副作用、

耐药性的产生以及药物滥用，使得农业部、欧盟和FAO/WHO对三氯苯唑的使用和最

高残留限量做出了详细的规定。农业部235号文件规定了牛、羊组织脂肪组织作为残

留残留监控的靶组织之一，残留标志物为三氯苯唑和三氯苯唑酮的代谢物，最高残留

限量为100µg/kg。

中的检测方法也屡见报道。但是，目前还没有牛羊脂肪组织的相关检测方法的报道。

因此通过有效的实验技术手段，对动物性食品中的有关药物残留进行监控，以确

保消费者对动物性食品消费的安全具有重要意义。

本实验以之前三氯苯唑在牛羊动物组织中的检测方法为基础，通过优化前处理方

法建立了同时确证定量检测三氯苯唑和三氯苯唑酮两种药物在牛羊脂肪组织的高效液

相色谱方法。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪（配紫外检测器）

试剂材料

甲醇、异辛烷、乙腈、正丙醇、无水乙醇均为色谱纯；实验用水为超纯水；无水

硫酸钠、乙酸铵均为分析纯；

三氯苯唑酮标准品（纯度99%）；

0.1mol/L盐酸溶液：取盐酸0.9mL，加水溶解并稀释至100mL；

0.02mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵1.54g，用水溶解并稀释至1000mL；

30%酸化乙醇溶液：量取0.1mol/L盐酸溶液30mL，用乙醇溶解并稀释至100mL；

5%氨化甲醇溶液：量取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至100mL，混匀。

一次性无菌注射器；针式过滤器(0.45µm，直径13mm)；

CleanertPCX/Silica固相萃取柱：200mg/3mL

样品制备

样品提取

称取2.0g试料，置于50mL离心管中，加无水硫酸钠4~5g，乙腈5mL，异辛

烷10mL，涡旋混匀，中速震荡5min，8000r/min离心5min，下层清液转入25mL鸡

心瓶中，残渣再用乙腈5mL，提取一遍，合并两次提取液，加正丙醇5mL，于55℃

水浴下旋转蒸发至干。加30%酸化乙醇、4mL、水4mL溶解，作为待净化液。

样品净化

先将CleanertPCX/Silica(200mg/3mL)小柱依次用3mL甲醇，3mL水，活化平衡；

然后将待净化液过柱；用3mL水淋洗小柱，弃去全部流出液，小柱挤干；最后用3mL

甲醇.，3mL5%氨化甲醇洗脱。收集洗脱液于55℃氮气吹干，用1mL流动相溶解残留

物，过0.45µm滤膜后，供高效液相色谱仪测定。

实验条件

液相条件

色谱柱：VenusilXBPC18（L），5µm，150Å，4.6×250mm

流动相：0.02mol/L乙酸铵溶液/乙腈（40︰60），使用前经微孔滤膜过滤

柱温：30℃

进样量：20µL

结果与讨论

由表3可知，采用固相萃取结合高效液相色谱法检测三氯苯唑酮加标回收率在60%

~100%之间，RSD值小于10%，能够满足检测要求。由图1可看出经CleanertPCX/Silica

固相萃取柱净化，采用VenusilXBPC18(L)色谱柱检测得到的三氯苯唑酮峰形良好，且

保留时间稳定。

结论

本实验建立了三氯苯唑及代谢物残留量的高效液相检测方法，并结合固相萃取技

术对羊肾中三氯苯唑和三氯苯唑酮的含量进行了测定。对于加标量为0.05mg/kg的样

品进行了检测，回收率在60%~100%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱

重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中三氯苯唑及其代谢物的残留量